Ypač stabilūs tymų, kiaulytės ir kitų virusų nukleokapsidžių baltymai infekcijų diagnostikai
Nukleokapsidžių baltymai yra pagrindiniai antigeniniai determinantai kiaulytės ir tymų virusuose. Mielėse Pichia pastoris ir Saccharomyces cerevisiae buvo gauta stipri kiaulytės ir tymų nukleokapsidžių baltymų (MuNP ir MeN, atitinkamai) raiška. Nustatyta, kad šie baltymai mielių ląstelėse susirenka į nukleokapsides primenančias daleles (NPD), kurios buvo išgrynintos natyviomis sąlygomis, naudojant ultracentrifugavimo CsCl tankio gradiente metodą.
Mes sukūrėme MuNP ir MeN baltymų gamybos procesus, kurie leidžia gauti ypač stabilius išgrynintų baltymų preparatus su puikiu atsikartojimu tarp nepriklausomų produkto ruošinių. Patobulinti MuNP ir MeN produktai yra nepaveikti dalinės degradacijos ir pasižymi ilgalaikiu stabilumu. NPD šiuose preparatuose yra ilgesnės ir stabilesnės, nes jų fragmentacija į mažesnius subvienetus taip pat yra nuslopinta.
Pav. Mielių ląstelėse susintetinto MeN baltymo produkto vaizdas elektroniniu mikroskopu. Nukleokapsides primenančios dalelės pasižymi būdinga “eglutės” morfologija, kuri panaši į natyvių virusinių nukleokapsidžių struktūrą.
Kiaulyte ir tymais sergančių pacientų kraujo serumai reagavo su rekombinantiniais nukleokapsidžių baltymais susintetintais abejose mielių rūšyse, todėl šiuo pagrindu gali būti kuriami specifiniai testai kiaulytės ir tymų laboratorinei diagnostikai atlikti.
Panašiai kaip kiaulytės ir tymų virusų baltymų atveju, mielėse susintetinti ir kitų žmogaus virusų rekombinantiniai nukleobaltymai. Šiuo metu imunologiniais metodais patikrinti ir pritaikomi virusinių infekcijų diagnostikai yra žmogaus respiracinio sincitinio viruso ir skirtingų tipų gripo bei paragripo virusų rekombinantiniai nukleobaltymai, išgryninti iš mielių ląstelių. Sukurti įvairūs produktų variantai apima padidinto reaktyvumo, didelio grynumo nukleobaltymus, formuluotus glicerolio tirpale, arba liofilintus produktus.
Išsamiau nukleobaltymų produktai aprašyti atskirai pagal skirtingus virusus (kol kas produktų aprašymai tik anglų kalba):